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薄層層析硅膠板的制作與應用

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薄層層析硅膠板的制作與應用

2019-12-25

一、立柱安裝

操作要點:安裝塔前,塔底應墊一層吸水棉,防止吸附劑泄漏

有兩種方法加載柱干法和濕法。

(1) 干柱裝填:薄層層析硅膠通過漏斗裝入柱內,中間不間斷,慢慢形成細流在管子里。也可以用橡膠電纜輕敲硅膠柱,使硅膠填充連續、均勻、致密。柱填料

之后,打開下端活塞,倒入洗脫液,將柱內空氣排出,保持一定的液位。

(2) 濕柱裝載:將準備好使用的洗脫液裝載到柱中,打開下活塞進行洗脫探員慢慢地流了出去。然后將硅膠緩慢且連續地倒入柱中(或將硅膠與適當的洗脫液混合制備的懸浮液緩慢地加入柱中的小硅膠中,并在重力和洗脫液的驅動下在柱中自由沉降。在此期間,流出的洗脫液應連續添加回柱中,以保持一定的液位,直到硅膠完全添加并放入柱中。內部結算不會改變。然后在硅膠上加一小塊濾紙或一點吸水棉。根據樣品在控制洗脫液液位到一定高度。

均質:攪拌成勻漿。加入兩倍于干硅膠體積的溶劑,用玻璃棒充分攪拌。如果洗脫液為石油醚-乙酸乙酯/丙酮體系,則將其與石油醚混合;如果洗脫液為氯仿/酒精系統,與氯仿混合。如果不能攪拌成勻漿,則溶劑中的水太大,特別是乙酸乙酯/丙酮,若與水不相容,須事先用無水硫酸鈉除去分配色譜晾干。氯仿用無水氯化鈣干燥以除去1%的酒精。如果樣品對酸敏感,則不能使用。

薄層層析硅膠板的制作與應用

二、裝載樣品

將待分離樣品溶于紹里柱裝樣時所用的洗脫液中,制備體積小、濃度高的樣品。將溶液加入色譜柱中的硅膠表面。如果樣品不溶于柱載用的洗脫液,則溶解樣品在揮發性溶劑中,加入硫柳汞(不多過柱中硅膠總量的1/10),并與之充分混合。除去溶劑后,將與樣品混合的硅膠均勻地添加到柱的頂部(始終保持洗脫液在恒定水平)用另一層硅膠覆蓋以裝載樣品。注意沿柱內壁緩慢加入,吊裝后硅膠上端面應保持平整。上面樣品中的硅1/60~1/30膠水。

薄層層析硅膠板的制作與應用

三、洗脫

用薄層色譜法可以選擇洗脫劑,當ILC形成時,Rf值為0.20.3。以試劑體系為洗脫體系,采用梯度洗脫法進行洗脫。首先,打開柱下端的活塞,保持洗脫液流速為每秒12滴。上端連續加入洗脫液(可如果單一溶劑的洗脫效果不好,可以混合溶劑洗滌(一般不過三種溶劑)通常采用梯度洗脫。洗脫液洗脫能力逐漸由弱變強。

四、收集和處理

洗提液按等份收集,每次收集使用的薄層層析硅膠量大致相等。每種洗脫液都很薄層質檢查,結合含有相同成分的洗脫液。經過濃縮和再結晶,通??梢缘玫?/span>單體成分。如果仍然是幾個單體組分的混合物,則單體組分的結晶不易分離出來。你需要進一步的色譜分析或用其他方法分離。



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